Cal520 AM 是一种新型荧光钙离子探针，为检测细胞内钙离子动员提供了高效均质的荧光检测方案。与现有绿色钙离子指示剂（如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM）相比，其信噪比和细胞内保留性显著提升。
一、作用原理
Cal520AM 本身无明显荧光，进入细胞后经酯酶去酯化激活；当与细胞内游离 Ca2?结合时，其分子内的荧光团会发生荧光共振能量转移（FRET），使荧光强度显著增强。通过检测荧光信号的动态变化，可实时定量细胞内 Ca2?浓度波动。
二、适用场景
1.活细胞内 Ca2?浓度实时监测；
2.药物筛选；
3.细胞凋亡、应激反应研究。
三、Cal520AM 的核心优势
相较于传统钙离子探针（如 Fura-2AM、Fluo-4AM），Cal520AM 在性能上实现了多维度优化，主要体现在以下几个方面：
1. 亮度优势：Cal520AM 与 Ca2?结合后的荧光量子产率（≈0.65）显著高于 Fluo-4AM（≈0.15），在相同 Ca2?浓度下，荧光信号强度可提升 3-5 倍；
2. pH 耐受范围宽，适配复杂细胞环境；
Cal520AM 荧光在 pH 6.0-8.5 范围内基本稳定，这一优势使其适用于酸性细胞器（如溶酶体），避免了 pH 干扰对实验结果的误判。
3.细胞毒性，支持长时间动态观察
Cal520AM 的 AM 水解效率高，且游离酸形式对细胞代谢的影响极小，在常规孵育浓度下，Cal520AM 可维持细胞存活超过 24 小时，且荧光信号稳定；
4.兼容多种检测平台，应用灵活性高
Cal520AM 的激发 / 发射波长（492nm/514nm）与荧光显微镜、荧光酶标仪等多通道检测平台适用。
CHO-K细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。将CHO-K细胞以每孔40,000个细胞的密度（体积100 μL）接种于96孔黑色壁/透明底板中过夜。向各孔中加入100 μL含有4 μM Cal-520? AM以及1 mM丙磺舒的HHBS溶液，并在37°C下孵育1小时。孵育后，移除染料加载培养基，更换为100 μL含有1 mM丙磺舒的HHBS溶液。随后，在使用FITC通道的荧光显微镜下，于加入50 μL 300 μM ATP溶液前后分别进行成像检测。
Cal520AM 作为新一代钙离子探针，通过在荧光亮度、pH 稳定性、细胞毒性及适用性上的全面优化，解决了传统探针在低信号、高干扰、短监测时间等方面的痛点。无论是基础科研中的单细胞 Ca2?动态分析，还是药物研发中的高通量筛选，Cal520AM 都能提供更精准、可靠的实验数据，成为当前活细胞钙离子检测领域的优选工具。
