Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞自噬检测的试剂盒 ，这种Cell Meter 自噬试剂盒采用Autophagy Green 作为特异性自噬体标志物来分析自噬的活性。该分析针对直接检测分离和附着的细胞中的自噬进行了优化。该试剂盒提供了测定方案的所有必需组分。 Cell Meter 自噬试剂盒适用于荧光显微镜，荧光酶标仪和流式细胞仪。 Autophagy Green 具有Ex / Em = 447/553 nm的大斯托克斯位移。自噬是一种进化上保守的降解过程，其靶向长寿命蛋白质，细胞器和其他细胞质成分以通过溶酶体途径降解。自噬途径与通常降解短寿命蛋白质的遍在蛋白 - 蛋白酶体途径的作用是互补的。自噬途径的对于多种细胞作用是必需的，包括饥饿期间的存活，细胞内成分，发育和免疫。在没有压力的情况下，自噬起到一种管家功能，去除受损害的细胞器和细胞成分，防止细胞毒性作用。

简要概述

1.用您的测试化合物准备细胞
2.添加Autophagy Green 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分钟
4.用洗涤缓冲液洗涤细胞
5.监测Ex / Em = 485 / 530nm处的荧光增加（截止= 515nm），使用FITC滤光片组的荧光显微镜或使用Ex / Em = 485 / 530nm通道的流式细胞仪

工作溶液配制

将20μL的Autophagy Green （组分A）加入10 mL染色缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Autophagy Green 工作溶液。 避光。 注意：对于一个96孔板，20μL的500X Autophagy Green （组分A）就足够了。有关细胞样品制备的指南，请点击查看 。

操作步骤

1.根据您的特异性诱导方案（约1-2×104个细胞/孔/ 96孔板）将细胞培养至适于自噬诱导的密度。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。

2.去除培养基。

3.向每个孔中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Autophagy Green 工作溶液。

4.将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育15至60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.用洗涤缓冲液（组分C）洗涤细胞3-4次，然后向每个孔中加入100μL洗涤缓冲液（组分C）。注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 485 / 530nm（截止= 515nm），具有FITC滤光器组的荧光显微镜或具有Ex / Em = 485 / 530nm通道的流式细胞仪监测荧光强度。