产品优势

稳定性好，可轻松适配高通量检测

适用范围

用于监测细胞凋亡

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度（截止= 610 nm）

溶液配制

储备溶液配制

1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液（200X）：

将65 μL DMSO加到Z-DEVD-ProRed （组分A）的小瓶中，制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液，避光储存。

工作溶液配制

将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。

注意：分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液（来自步骤2.2）和测定缓冲液（组分B）。 避免反复冻融。

有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.准备细胞：

1.1 对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔，或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔，过夜培养。

1.2 对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中，用于96孔；或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。

注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的佳细胞密度。

2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 μL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 μL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

3.将细胞板在37°C，5％CO2的培养箱中孵育（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时）以诱导凋亡。

4.加入Caspase 3/7底物工作溶液（100 μL /孔/ 96孔板或25 μL /孔/ 384孔板。）

5.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。

注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定的样品中添加1 μL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。

6.使用荧光酶标仪（Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm））监控荧光强度。

注意：有时，底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式，则以800 rpm的速度离心细胞板（特别是悬浮细胞）2分钟（制动）。

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