产品介绍

为解决BCECF AM的异构体问题，研究人员开发了BCFL探针。与BCECF类似，BCFL同样具有pH依赖的双激发特性，其pKa值约为7.0。BCFL在454nm处具有等吸收点的双激发光谱，使其成为优异的激发比率法pH指示剂。BCFL比率成像技术不受染料浓度、光程、细胞渗漏和光漂白率等变量的影响。BCFL AM为单一异构体，相比含多种异构体的BCECF AM，其pH测量结果具有更好的可重复性。百萤生物为您提供RatioWorksBCFL,AM BCECF的 代替品 不受染料浓度、光程长度、细胞渗漏以及光漂白速率等多种变量因素的影响。

实验方案

储备液配制

（注意事项：若无特殊说明，所有未使用的储备液均应分装为单次使用量，配制完成后保存于-20°C，避免反复冻融。）

RatioWorks™ BCFL AM储备液

使用高纯度无水DMSO配制10-20 mM的RatioWorks™ BCFL AM储备液。

注：溶解于DMSO后，RatioWorks™ BCFL AM应为无色透明溶液。

工作液配制

RatioWorks™ BCFL AM工作液

实验当天，将RatioWorks™ BCFL AM溶解于DMSO或取适量储备液恢复至室温。使用选定缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）配制5-50 μM的工作液。

注意：1.使用非离子型表面活性剂Pluronic® F-127提高AM酯的水溶性，染色缓冲液中Pluronic® F-127终浓度建议为0.02%（百萤生物提供多种Pluronic® F-127产品）。

2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化探针的渗漏（百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性钠盐和稳定溶液等）。

实验操作流程

（以下为哺乳动物活细胞加载RatioWorks™ BCFL AM的推荐方案，请根据实际需求调整。）

1.按实验要求制备活性细胞。

2.次日，向细胞板中加入RatioWorks™ BCFL AM工作液（96孔板：100 μL/孔；384孔板：25 μL/孔）。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，需在染料加载前用新鲜HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板：100 μL/孔；384孔板：25 μL/孔）。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱中孵育30-60分钟。

4.使用HHBS或选定缓冲液替换染料工作液，去除多余染料。

5.使用HHBS或选定缓冲液制备化合物板（96孔板：50 μL/孔；384孔板：25 μL/孔）。

6.进行pH检测，并同步选用以下任一方式进行荧光监测：

配备FITC滤光片组的荧光显微镜

荧光酶标仪（激发/发射波长=490/535 nm，截止波长515 nm）

比率法检测需同步监测：

激发/发射1=430/535 nm（截止515 nm）

激发/发射2=505/535 nm（截止515 nm）

AAT Bioquest公司长年以来与西安百萤生物互补优势，为国内外广大用户提供光谱检测，底物显色，荧光发光技术等全系列解决方案。近年来，百萤生物已与多家药企、CRO公司、众多高校及科研单位建立了长期稳定的合作关系；我们的服务宗旨：为广大科研用户提供更好的服务.
1.更高品质保障和性价比高的产品
2.严格的质量控制，确保每一批次产品的稳定性和灵活多样的包装规格选择
3.每周都有现货补充，货期短到您意想不到，满足客户的需求就是我们的宗旨，只要您下单，我们就能保证您在短期内收到所需产品。
百萤生物给您优惠的折扣和专业的技术支持，我们将一如既往的为客户和代理商提供售后保障，满足不同实验的需求 。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其它非科研用途！