荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞游离钙浓度的变化。随后于1989年推出Fluo-3，后来开发出Fluo-4，Fluo-8和Cal-520，具有改进的信号/信号比。但是，Fluo-4仍存在一些严重问题。例如，对于Fluo-3，在使用Fluo-4的所有细胞内钙测定中，需要使用丙磺舒以防止细胞负载的Fluo-4从细胞中泄漏。探针与基于Fluo-4的钙测定法的使用损害了测定结果，因为丙磺舒被证实具有多种复杂的细胞效应。