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Annexin V-iFluor 633 标记 货号20069
  • 英文名称:Annexin V-iFluor® 633 conjugate
  • 品牌:AAT Bioquest
  • 产地:美国
  • 型号:100 Tests
  • 货号:20069
  • 纯度:95
  • 发布日期: 2020-10-16
  • 更新日期: 2024-08-21
产品详请
产地 美国
品牌 AAT Bioquest
货号 20069
用途 化学试剂
英文名称 Annexin V-iFluor® 633 conjugate
包装规格 100 Tests
纯度 95%
CAS编号
保质期 12个月
是否进口


产品介绍

膜膜联蛋白(Annexins)是一类依赖钙离子与磷脂膜结合的蛋白质家族。作为细胞凋亡研究的核心工具,膜联蛋白V(Annexin V)能特异性探知细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸(PS)——这一特征不仅是凋亡标志,也存在于其他细胞死亡形式中。

膜联蛋白V-荧光偶联物(Annexin V-dye conjugates)通过检测PS外翻现象,成为凋亡监测的黄金标准。在凋亡进程中,磷脂酰丝氨酸会从细胞膜内侧翻转向外侧,这种表面PS的暴露作为凋亡早中期的普适性指标,其检出时间点甚至早于细胞形态学改变。

Annexin V-iFluor 633标记其光谱特性与Alexa Fluor® 633相似, 激发/发射波长分别约为638 nm和655 nm(注:Alexa Fluor®为Invitrogen公司注册商标)。


产品实验操作步骤摘要

1.制备含测试化合物的细胞样本(200 μL/样本)

2.加入膜联蛋白V偶联物检测溶液

3.室温避光孵育30-60分钟

4.使用流式细胞仪或荧光显微镜进行分析

储存与处理条件

荧光标记膜联蛋白V偶联物储存于含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS缓冲液(pH 7.4)中。为保持稳定性,建议-20℃避光保存,避免反复冻融(可能影响蛋白完整性)。在推荐条件下可稳定保存至少6个月。


标准实验方案

膜联蛋白V偶联物细胞孵育步骤

1.配制膜联蛋白V结合缓冲液:10 mM HEPES,140 mM NaCl,2.5 mM CaCl?,pH 7.4

2.用测试化合物处理细胞诱导凋亡(如:Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时)

3.离心收集细胞(1-5×10?细胞/管)

4.用200 μL膜联蛋白V结合缓冲液重悬细胞

5.加入2 μL膜联蛋白V偶联物

(可选)加入死细胞染料如碘化丙啶(货号17585)标记坏死细胞

6.室温避光孵育30-60分钟

7.在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液(来自步骤1)以增加体积

8.使用流式细胞仪或荧光显微镜检测荧光强度

流式细胞仪检测

使用匹配滤光片的流式细胞仪定量膜联蛋白V结合情况

注:贴壁细胞因收获过程可能损伤膜结构,常规不建议用于流式检测。但Casiola-Rosen等已建立相关实验方法。


荧光显微镜检测

1.从步骤6中吸取细胞悬液,使用膜联蛋白V结合缓冲液(步骤1)洗涤1-2次,随后用相同缓冲液重悬细胞。

2.将细胞悬液滴加至已覆盖盖玻片的载玻片上。

注:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上进行培养。

3.完成膜联蛋白V偶联物孵育(步骤6)后,用膜联蛋白V结合缓冲液(步骤1)洗涤1-2次,并重新加入该缓冲液至盖玻片。

4.倒置载玻片观察细胞。也可在膜联蛋白V偶联物孵育后,使用2%甲醛固定细胞,并通过配备相应滤光片组的显微镜进行观察。




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