在低pH值下，RatioWorks PH165在远红光谱区域的荧光很弱，而在红光谱区域的荧光很强。 随着pH的增加，它在远红光谱中显示出较高的荧光，而在红光谱中显示出较低的荧光。该探针可分别在497/594 nm和578/654 nm双重激发/发射下定量测定4至9范围内的胞质pH。 PH165的pKa为?7.1。 RatioWorks PH165的红色荧光光谱使其适用于绿色荧光团（例如GFP）的多重检测。 RatioWorks PH165 AM具有细胞渗透性，并与各种平台兼容，例如荧光显微镜和酶标仪。